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组织/细胞RNA快速提取试剂盒(双柱型)
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产品: 浏览次数:1031组织/细胞RNA快速提取试剂盒(双柱型) 
品牌: abigen
型号: abigen
规格: abigen
单价: 面议
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发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 2022-03-15
最后更新: 2016-10-21 16:44
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说明书下载:http://pan.baidu.com/s/1bVYiFc

组织/细胞RNA快速提取试剂盒--离心柱
AB2071   20 次 /  AB2072   50 次    /  AB2073   100 次

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组织/细胞RNA提取试剂盒

 

适用范围:

ABIspinTM系列产品适用于快速提取动物组织细胞总RNA,打造无DNA残留的核酸纯化试剂盒,区别以前普通纯化试剂盒DNA残留困扰,艾比根独特的DNA清除柱,能有效的吸附DNA,最大限度的吸附DNA,保证RNA洗脱后基本无残留DNA,RNA可用于反转录PCR,荧光定量PCR等。

产品介绍

ABIspinTM系列产品是艾比根生物开发的无DNA残留的RNA提取新方法,独特的DNA清除柱技术可以有效清除DNA残留,得到的RNA一般不需要DNase I消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后裂解混合物用DNA清除柱清除柱DNA,RNA被选择性洗脱滤过,吸附在基因组DNA清除柱上的残留DNA无法洗脱,可以连同柱子一起丢弃从而清除掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的DEPC处理水将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

提示:

ð 操作前在裂解液ALY中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml 裂解液ALY 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的裂解液ALY 4℃可放置一个月。

1. 组织培养细胞

a. 收集<107悬浮细胞到一个1.5ml离心管,对于贴壁细胞,微孔板培养可以直接裂解,细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

b. 13,000rpm离心10秒(或者300g离心5分钟),使细胞沉淀下来。完全吸弃上清,留下细胞团,注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

c. 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬,加入500μl(<5x106细胞)或者600μl(5x106-1x107细胞)裂解液ALY,吹打混匀后用手剧烈振荡20秒,充分裂解。

d. 用带钝针头的一次性 1 ml(配0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

e. 接操作步骤项下3。

2. 动物组织(例如鼠肝脑)

a. 电动匀浆:新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,加入600μl(<20mg组织)裂解液ALY后电动彻底匀浆20-40秒。

b. 直接裂解液研磨法(适合少量样品材料,方法见附录2

c. 液氮研磨+匀浆:在液氮中研磨组织成细粉后,取适量组织细粉10-20mg(对于RNA酶含量过的样品,起始样品不宜过多,以免抑制不完全造成降解,具体起始材料用量可以自行调整,)转入装有600μl组织裂解液ALY的1.5ml离心管中, 用手剧烈振荡20秒,充分裂解。用带钝针头的一次性 1 ml(配0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

d. 将匀浆后裂解物13,000rpm离心1-2分钟,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物。

e. 接操作步骤项下3。

3. 吸取500μl上清到DNA清除柱中,(吸附柱放入收集管中)。

4. 13,000 rpm离心1分钟;收集滤液(大约500μl 滤液RNA在收集管中,请勿丢弃!!)取下DNA清除柱,直接向2ml收集管中加入250μl (0.5倍体积)的无水乙醇,用移液器吹打混匀如果需要得到更多RNA,可按比例放大

5. 立刻将混合物(每次小于750μl,多可以分两次加入)加入一个RNA吸附柱中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心1分钟,弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。

6. RNA吸附柱中加入500μl 去蛋白液RB,13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。

7. RNA吸附柱中加入500μl 漂洗液RW,13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。重复漂洗一遍。

8. 将RNA吸附柱放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 取出RNA吸附柱,放入一个1.5ml的RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-100μl RNA洗脱液或DEPC处理水(事先在 65℃水浴中加热可提高产量), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

10. 如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl DEPC处理水重复步骤9,合并两次洗液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的

RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选

择。

附录2:(直接研磨法

直接研磨法(少量组织可选择

a.  新鲜组织称重后取30-50mg起始材料不要过,以免造成DNA清除不完全,造成降解,一般可根据不同材料自行调整起始材料的梯度,已达到最好的效果)迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取50mg放入研钵), 加入10体积(1ml裂解液ALY和10 μl  β-巯基乙醇使终浓度为1%(也可直接加入到裂解液中,使β-巯基乙醇终浓度为1%,加入后裂解液应当置于4℃,裂解液可保持一个月左右);室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液ALY立刻充分接触以抑制RNA酶活性。(一般保证裂解液离心后由500μl左右最好由于研钵会吸附一部分裂解液,故可以先用裂解液润湿研钵后再加入600μl左右裂解液)

b.  将裂解物转入离心管,剧烈漩涡振荡30-60秒,室温放置3-5min,将裂解物4℃,13,000 rpm离心1-2分钟。 

c.  立刻接操作步骤的步骤3。

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