| 设为主页 | 保存桌面 | 手机版 | 二维码
普通会员

北京艾比根生物技术有限公司

分子生物学试剂,耗材,仪器,抗体,技术服务

新闻中心
产品分类
联系方式
  • 联系人:戴辉
  • 电话:13683383835
  • 邮件:info@abigen.com
  • 手机:13683383835
  • 传真:010-57158563
您当前的位置:首页 » 供应产品 » 组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒
组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒
点击图片查看原图
产品: 浏览次数:657组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒 
品牌: abigen
型号: abigen
规格: abigen
单价: 面议
最小起订量:
供货总量:
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 2022-03-15
最后更新: 2016-10-21 16:44
  询价
详细信息

凡在我公司网上商城www.abigen.cn订购产品,均可享受7-74折优惠!更有不同季度促销产品,折扣更多!具体详见公司网站www.abigen.cn首页新闻快讯。  

注:可配合我公司的可见光凝胶切胶仪或者使用我公司专业研发生产的可见光凝胶成像系统检测效果,拍照。避免紫外对人体和样品带来的伤害,条带清晰,操作简便。详情可见www.abigen.cn

说明书下载:http://pan.baidu.com/s/1o8roxQU

组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒--离心柱
DN0701   50 次 /  DN0702   100 次    /  DN0703   200 次

Picture
保存条件
蛋白酶K于-20℃保存。
其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年
产品说明
    本产品用于多种动物组织(新鲜或冻存)与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料或不超过1×106-107培养细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA(OD260/OD280 = 1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。
产品特点
高效:一次可获得3-35 μg基因组DNA。
快速:30min内即可获得超纯的基因组DNA。
通用:可从多种样本材料中获取基因组DNA。
安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。
高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。
产品用途
常规限制性酶切
PCR扩增
文库构建
Southern 杂交
分子标记分析质量控制
纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 组织培养细胞
a. 收集约105-106悬浮细胞到一个1.5ml离心管;对于贴壁细胞,应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
b. 13,000rpm离心10秒,使细胞沉淀下来。弃上清,留下细胞团和大约10-20μl残留的液体。
c. 加200μl 1XPBS重悬洗涤细胞,13,000rpm离心10秒,使细胞沉淀下来。完全吸弃上清, 将细胞沉淀重悬于180μl 1XPBS中
d. 加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液,充分混匀,再加入200μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,在70℃放置10分钟。
可选做步骤: 如果RNA残留较多,需要去除RNA,可以在加入200μl 结合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
e. 冷却后加100μl异丙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
f. 将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液。
g. 接操作步骤项下4。
2. 动植物组织(例如鼠肝脑或者植物叶片)
a. 新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块(切成微块可以提高产量)后取20-50mg,转入装有180μl组织裂解液TL的1.5ml离心管中, 用大口径枪头吹打混匀。
b. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
c. 将裂解物放置在55℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
可选做步骤: 如果RNA残留较多,需要去除RNA,可在完成步骤c后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
d. 加入200μl 结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置10分钟。
e. 冷却后加100μl 异丙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
f. 用1ml的枪头吸取混合物,将混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液。
g. 接操作步骤项下4。
3. 动物组织(鼠尾)
a. 将0.2-0.5cm的鼠尾巴尖(即20-50mg)剪碎(一定要剪0-2cm范围内的尾巴尖,否则裂解效果不好),或者在液氮中研磨组织成细粉后,转入装有180μl组织裂解液TL的1.5ml离心管中, 用大口径枪头吹打混匀。
b. 加入20μl的蛋白酶K(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。
c. 将裂解物放置在55℃水浴3小时或者直到组织消化完全,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
可选做步骤: 如果RNA残留较多,需要去除RNA,可在完成步骤c后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
d. 用一个1ml不带针头的一次性输液器抽打裂解物2-3次。
e. 加入200μl 结合液CB和100μl 异丙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。
f. 13,000rpm 离心5分钟,将上清加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
g. 接操作步骤项下4。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量,必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
4. 加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃废液。
5. 加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
6. 加入500μl漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
7. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB (洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好), 室温放置3-5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
9. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
DN0701   50 次
DN0702   100 次
DN0703   200 次
询价单
0条  相关评论