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λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒
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产品: 浏览次数:586λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒 
品牌: λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒
型号: λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒
规格: λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒
单价: 1.00元/1
最小起订量: 1 1
供货总量: 1 1
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 2022-03-15
最后更新: 2016-10-21 16:44
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λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒
DN2201 50次/DN2202 100次

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λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒
DN2201 50次
DN2202 100次
 产品介绍
λ噬菌体载体广泛用于文库筛选,目的克隆培养获得大量的噬菌体颗粒需要提取λ噬菌体DNA来开展测序等后续工作。λ噬菌体裂解培养物离心后的上清,首先用RNase A /DNase I混合酶消化去除残留的宿主菌DNA/RNA,沉淀收集噬菌体,噬菌体被SDS裂解,残留碎片通过沉淀离心去除掉。裂解物上清中的λ噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将λ噬菌体DNA从硅基质膜上洗脱。 
产品特点:
1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 节省时间,简捷,可用于液体培养裂解物和固体培养板的提取,单个样品操作一般可在1.5小时内完成。
3. 产量高,典型的产量10ml λ噬菌体裂解培养物上清可以提取约10µg λ噬菌体DNA。
4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。可以直接用来酶切和测序。
 注意事项
1. 使用转速可以达到13,000rpm的冷冻离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃备用。
3. 需要自备氯仿,20%SDS。
4. 结合液LB含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
以10 ml噬菌体感染细菌培养上清提取举例:
提示:
 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
 将噬菌体沉淀液放在冰上预冷。
1. 将0.5%氯仿处理后的λ噬菌体感染的液体培养物10,000g(约12,000rpm) 4℃离心10分钟去除细胞碎片和残渣。
转速不能过高,时间不能过长,否则噬菌体可能和碎片一起沉淀,降低产量。
2. 取10ml上清,加入20μl RNase和20μl DNase充分混匀37℃温育30分钟。
每个噬菌体培养上清因生长和裂解情况不同而残留RNA/DNA量不等。RNase/DNase消化过头,可能减少产量;消化不完全,可能未消化的DNA/RNA和细胞碎片粘去部分噬菌体减低产量并/或者导致最后污染宿主菌DNA,因此应该根据实际情况适当调节用量和消化时间。
3. 加入2 ml 冰预冷的噬菌体沉淀液,轻柔充分混匀后置冰上冷却(培养板裂解物必须在冰上放置30分钟)。
4. 10,000g(12,000rpm)4℃离心10分钟,弃上清,干燥1分钟。沉淀下来的噬菌体外观为透亮或者稍白的沉淀。
5. 加入500μl裂解缓冲液,吹打重悬噬菌体,加入100μl 20%SDS,立即轻柔颠倒混匀4-6次后,70℃温育10分钟,然后置冰上冷却。
6. 加入100μl杂质沉淀液,立即轻柔颠倒混匀4-6次,最高速13,000g 4℃离心10分钟。
7. 仔细将上清转入新的离心管,加入350μl结合液LB,轻柔涡旋混匀。
8. 将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液。
吸附柱一次最多只可以容纳大约700μl混合物,因此需要分次把混合物上到吸附柱内,重复步骤8。
9. 加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃废液。
10. 可选步骤:重复步骤9一遍。
11. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 50℃水浴中预热), 室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于40μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
13. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
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