| 设为主页 | 保存桌面 | 手机版 | 二维码
普通会员

北京艾比根生物技术有限公司

分子生物学试剂,耗材,仪器,抗体,技术服务

新闻中心
产品分类
联系方式
  • 联系人:戴辉
  • 电话:13683383835
  • 邮件:info@abigen.com
  • 手机:13683383835
  • 传真:010-57158563
您当前的位置:首页 » 供应产品 » 无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
点击图片查看原图
产品: 浏览次数:935无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒 
品牌: 无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
型号: 无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
规格: 无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
单价: 面议
最小起订量:
供货总量:
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 2022-03-15
最后更新: 2016-10-21 16:44
  询价
详细信息

凡在我公司网上商城www.abigen.cn订购产品,均可享受7-74折优惠!更有不同季度促销产品,折扣更多!具体详见公司网站www.abigen.cn首页新闻快讯。  

无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
PL0401 20次/PL0402 50次

Picture
无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒
PL0401 20次
PL0402 50次
 产品介绍
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素,然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 独有的去蛋白液配方,可以高效去除核酸酶。即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3. 独特内毒素清除配方,清除内毒素效果一般小于<0.1 EU/ug。
4. 快速、方便, 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好, 直接可以用于转染、酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
 第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
 将RNase A全部加入溶液P1中,混匀,每次使用后置于2-8℃保存。
 将溶液PⅢ放在冰上预冷。
1. 取1.5-4.5毫升过夜培养的菌液,9,000rpm离心30秒,尽可能的倒干上清,收集菌体。
收集超过1.5毫升菌液,可以离心弃上清后,在同一个1.5ml管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体。
2. 用250μl溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。 
如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3. 加250μl的溶液P2,温和地上下翻转4 -7次使菌体充分裂解,室温放置4分钟。
温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应超过5分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘稠后就可以做下一步,不是一定要准确的5分钟。
4. 加350μl溶液PⅢ,立即温和地上下翻转4 -7次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。冰上静置3-5分钟,13,000rpm离心10分钟,小心取上清至一个1.5毫升的离心管,冰上预冷。
加入溶液PⅢ后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。
5. 加入0.1体积冰预冷的内毒素清除剂到上一步所得上清,颠倒旋转混匀7-10次,冰浴或者冰上放置>=10分钟,中间偶尔颠倒混匀几次。
内毒素清除剂加入上清后,上清可能会变得浑浊,但是冰浴后应恢复清亮。
6. 42℃水浴,溶液又会变为浑浊,颠倒混匀后,42℃温育20-30分钟。
7. 室温16,000 x g离心10 min分相(温度低时,内毒素清除剂无法分相,因此必须至少20°C以上室温离心)。
8. 溶液必须分为上下两相,否则应重复步骤6-7。上层水相含DNA,下层油状相含内毒素。将含DNA的上层水相转移到新管(注意不要吸到油状层,含大量内毒素),弃油状层(可重复抽提1-2次,即重复步骤5-8 1-2次)。
下相体积较小,室温较高(如夏季)时候可能表现为混浊,和透明的上相分层明显,如果室温较低(如冬季),下相可能表现为透明的油状物质,和透明上相分层仅仅表现为界面的折光性不一致,应该仔细观察。
9. 向上一步所得上层水相中加入0.5体积结合液PB后,充分混匀,分两批转入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中),13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。
10. 可选步骤: 加入500μl去蛋白液PD,13,000rpm 离心30-60秒,弃废液。
此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质,如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株,核酸酶含量丰富,应加此步骤;如所用菌株为XL-1 Blue和DH5α等缺陷型菌株,核酸酶含量低,则可略过此步骤。
11. 加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),13,000rpm 离心30-60秒,弃掉废液。
12. 加入500μl漂洗液WB,13,000rpm 离心30-60秒,弃掉废液。
13. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
14. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,13,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量质粒,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量

注:可配合我公司的可见光凝胶切胶仪或者使用我公司专业研发生产的可见光凝胶成像系统检测效果,拍照。避免紫外对人体和样品带来的伤害,条带清晰,操作简便。详情可见www.abigen.com

说明书下载:http://pan.baidu.com/s/1c1992gS


询价单
0条  相关评论