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北京艾比根生物技术有限公司

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多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
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产品: 浏览次数:1240多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒 
品牌: 多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
型号: 多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
规格: 多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
单价: 面议
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发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 2022-03-15
最后更新: 2016-10-21 16:44
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详细信息

凡在我公司网上商城www.abigen.cn订购产品,均可享受7-74折优惠!更有不同季度促销产品,折扣更多!具体详见公司网站www.abigen.cn首页新闻快讯。  

多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
RN0901 20次/RN0902 50次

Picture
多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
AB2131 20次
AB2132 50次
适用植物 多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒
棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥.大豆.月季、芦荟、仙人掌、水稻、玉米、白玉兰、毛白杨、樱花、葡萄、紫菜、绿藻.香蕉、青花菜、地被菊等等

  产品介绍:艾比根ABIspinTM系列产品是在通用植物RNA(货号AB214)的基础上开发的无DNA残留的RNA提取新方法,独特的DNA吸附柱技术可以有效清除DNA残留,得到的RNA一般不需要DNase I消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后裂解混合物用乙醇调节DNA结合吸附到基因组DNA清除柱,然后RNA被选择性洗脱滤过,吸附在基因组DNA清除柱上的残留DNA无法洗脱,可以连同柱子一起丢弃从而清除掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去DNA残留液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的DEPC处理水将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点:

1. 完全不使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 简捷,单个样品操作一般可在25分钟内完成,世界上最简单快速的试剂盒。

3. 基因组DNA清除柱技术可以有效清除DNA残留,得到的RNA一般不需要DNase I消化,可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

4. 适应性极其广泛,可以提取包括棉花、松针、冬青树叶、葡萄叶片、等100多种国内外试剂盒提取失败的样品。

5. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.2,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。

v   注意事项

1. 所有的离心步骤均在室温完成(4离心也可以)使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415R 或者类似离心机。

2. 需要自备无水乙醇,研钵(可选)。

3. 样品处理量绝对不要超过基因组DNA吸附柱DX和和RNA吸附柱RZ处理能力,否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量,将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

4. 裂解液RPLRNA洗脱液RE中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. 关于DNA 的微量残留:

一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase I消化也无法做到100%无残留),本公司的ABIspinTM RNA提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术,绝大多数DNA已经被清除,不需要DNase I消化,可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:

1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于柱上消化DNase I处理后的RNA清洁 ,请联系我们索取具体操作说明书。

4) 在步骤去DNA洗脱液DE漂洗前,直接在RNA吸附柱RZ上进行DNase I柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒前可先索取具体操作说明书。

 

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

提示:

ð 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!

1. 直接研磨法(提取简单植物样品推荐此法,但是简单样品也可以用液氮研磨法):

a.  新鲜植物组织称重后取50-100mg迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg放入研钵), 加入10体积(1ml裂解液RPL 室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT立刻充分接触以抑制RNA酶活性。

b.  将裂解物转入离心管,剧烈漩涡振荡30-60秒,室温放置5min,将裂解物4℃,13,000 rpm离心5-10分钟。

c.  取500μl裂解物上清(在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

d.  立刻接操作步骤的步骤3。

2. 液氮研磨法(提取复杂,易降解样品时推荐此法):

a.  取600μl裂解液RPL,转入1.5ml离心管中。

b.  液氮中研磨适量植物组织成细粉后,取50mg细粉转入上述装有裂解液RPL的离心管, 立即剧烈漩涡振荡30-60秒,充分裂解。

56温育1-3分钟有助于裂解植物,但是淀粉含量高的植物不能温育因为提高的温度可能导致淀粉膨胀。

c.   用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

d.  将裂解物13,000 rpm离心5-10分钟。

e.  500μl裂解物上清(在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

f.  立刻接操作步骤的步骤3。

注意:以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理,可以提高产量。也就是使用1ml的裂解液RPL和100mg的样品。

3. 将混合物(每次小于750μl,多可以分两次加入)加入一个DNA吸附柱DX柱中,(清除柱放入收集管中)13,000 rpm离心2分钟,弃掉废液。

确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。

4. 将DNA吸附柱DX柱子放在一个干净2ml离心管内(一般不用RNase free 或者DEPC处理,一般干净的新离心管即可。也可使用RNA吸附柱RZ配套的新的干净收集管),在DNA吸附柱DX柱内加500μl  RNA洗脱液RE,13,000 rpm离心30秒, ※收集滤液(RNA在滤液中),(注意:RNA洗脱液RE滤液中含有RNA,请勿丢弃!!!同时DNA吸附柱DX中含有DNA,如果后期需要得到DNA,可参考附录1DNA分离方法分离DNA),用微量移液器较精确估计滤过液体积(通常为450-500μl左右,滤过时候损失体积应该减去),加入0.5倍体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

5. 立刻将混合物(每次小于750μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心2分钟,弃掉废液。

确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。

6. 加700μl DNA洗脱液DE,室温放置1分钟,13,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

7. 加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。

8. 将RNA吸附柱RZ放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 取出RNA吸附柱RZ,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加35-100μl DEPC处理水(事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

10. 如果预期RNA产量>30μg,加30-50μlDEPC处理水重复步骤9,合并两次洗液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。

 

附录1(分离DNA方法)

1. 取上述步骤4中经过RNA洗脱液RE处理后的DNA吸附柱DX,放置DNA收集管上

2. DNA吸附柱DX加入500μl   70%乙醇(用去离子水配制)洗涤13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液,重复2遍

3. 室温晾干3-10min,只至无酒精残留

4. 取出DNA吸附柱DX,放入一个1.5ml离心管中,根据预期DNA产量在吸附膜的中间部位加50-100μl  TE(pH >8.0)(事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

5. DNA检测,保存

注:可配合我公司的可见光凝胶切胶仪或者使用我公司专业研发生产的可见光凝胶成像系统检测效果,拍照。避免紫外对人体和样品带来的伤害,条带清晰,操作简便。详情可见www.abigen.cn

说明书下载:http://pan.baidu.com/s/1mi2hMdE

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